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凍存管該如何進行冷凍呢✘☁☁✘?看看本篇吧
釋出時間•◕✘·╃:2022-08-17   點選次數•◕✘·╃:54次
  凍存管又稱菌種儲存管₪│▩☁₪、磁珠儲存管₪│▩☁₪、磁珠凍存管▩₪•。微生物實驗室常用的菌種儲存方法有牛奶法₪│▩☁₪、甘油法₪│▩☁₪、斜面法等▩₪•。複雜程度各異₪·╃◕,效果也差別很大▩₪•。
 
  凍存管的使用是一門學問₪·╃◕,並不是開啟液氮罐₪│▩☁₪、放入凍存管₪│▩☁₪、關上液氮罐這樣簡單的三部曲可以完成的▩₪•。科學正確地使用凍存管₪·╃◕,可以避免樣本的損失₪·╃◕,並保護試驗人員的安全▩₪•。
 
  下面讓我們一起來了解一下凍存管的冷凍步驟吧
 
  用預熱的PBS溶液洗滌細胞₪·╃◕,吸取溶液₪·╃◕,含有胰蛋白酶和EDTA的溶液覆蓋細胞(薄薄的液層足夠₪·╃◕,胰蛋白酶和EDTA的濃度需要根據細胞系確定)▩₪•。
 
  37℃孵育細胞3-5分鐘▩₪•。
 
  細胞從底部脫離之後₪·╃◕,終止孵育₪·╃◕,加入含有血清的培養基₪·╃◕,用移液器輕輕地懸浮細胞▩₪•。
 
  離心細胞懸液(500xg,5分鐘)₪·╃◕,用含有血清的培養基重新懸浮▩₪•。
 
  細胞計數▩₪•。
 
  離心細胞懸液(500xg,5分鐘)₪·╃◕,去除上清液₪·╃◕,用適量體積的含有血清的培養基重新懸浮細胞▩₪•。
 
  以1:1體積比混合細胞和凍存液(60%培養基₪·╃◕,20%胎牛血清₪·╃◕,20%DMSO)₪·╃◕,然後轉移到Cryo.sTM凍存管中▩₪•。凍存的細胞密度為1-5×106個/毫升▩₪•。
 
  含有細胞的Cryo.sTM凍存管建議以−1K/min的速率降溫₪·╃◕,可以將凍存管置於−70℃含有異丙醇的容器中▩₪•。如果Cryo.sTM凍存管儲存其他樣品₪·╃◕,可以直接放置在−20℃₪·╃◕,−70℃或者液氮的氣相▩₪•。
 
  為了確保樣品冷凍均勻₪·╃◕,4mL和5mL的Cryo.sTM凍存管需要先置於在−20℃冰箱過夜₪·╃◕,然後再轉移到−70℃或者液氮的氣相▩₪•。
 
  然後轉移Cryo.sTM凍存管到液氮罐▩₪•。為了避免汙染(如支原體)和安全考慮₪·╃◕,請將Cryo.sTM凍存管置於液氮的氣相₪·╃◕,切勿置於液相▩₪•。

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